發(fā)布時間:2013-11-06 13:51:51
菌種保藏的意義
微生物學(xué)研究和微生物育種工作的重要組成部分是進(jìn)行菌種保藏，其任務(wù)首先是使菌種不致死亡，同時還要盡可能設(shè)法把菌種的優(yōu)良條件保持下來而不致向壞的方面轉(zhuǎn)化。 因為從事微生物學(xué)以及生命科學(xué)研究的基本材料是菌種，特別是利用微生物進(jìn)行有關(guān)生產(chǎn)如抗生素、氨基酸、釀造等工業(yè)，更離不開菌種。
菌種保藏的原理
一般可通過保持培養(yǎng)基營養(yǎng)成分在最低水平缺氧狀態(tài)，干燥和低溫，使菌種處于“休眠”狀態(tài)，抑制其繁殖能力。菌種保藏主要是根據(jù)菌種的生理生化特點，人為創(chuàng)造條件使孢子或菌體的生長代謝活動盡量降低，以減少其變異。一種好的保藏方法首先應(yīng)能長期保持菌種原有的優(yōu)良性狀不變，同時還需考慮到方法本身的簡便和經(jīng)濟(jì)，以便生產(chǎn)上能推廣使用。
菌種保藏的方法
砂土管保藏法：將孢子懸浮液轉(zhuǎn)移至滅過菌的砂土管中，于真空干燥器內(nèi)用真空泵抽干，再轉(zhuǎn)至有干燥劑的容器中，密封低溫保藏。本方法是用人工方法模擬自然環(huán)境使菌種得以柄息。適用于細(xì)菌的芽孢、霉菌和放線菌孢子的保藏，不適于對干操敏感的無芽孢的細(xì)菌和酵母菌。主要包括砂土制備和真空抽干兩步。
超低溫保藏法：由于現(xiàn)在超低溫冰箱的使用已較普及，所以菌種的超低溫保藏法在生產(chǎn)企業(yè)和研究機(jī)構(gòu)已得到廣泛應(yīng)用。該方法的要點是：將要保藏的菌種置于10%甘油或二甲基亞砜保護(hù)劑中，密封于試管或安瓿管中，然后將其放入超低溫冰箱中于- 70℃下保藏。該法簡便易行，而且保藏效果較好。
石蠟油封保藏法：將生長好的新鮮斜面在無菌條件下倒入已滅菌的液體石蠟，油層要高出斜面上端1cm，使之與空氣隔絕，然后垂直放于室溫或冰箱內(nèi)保藏即可。這種方法也比較簡便，且保藏時間一般可長達(dá)1年以上。適于保存部分霉菌、酵母菌、放線菌，但對細(xì)菌效果較差，對某些能同化烴類的微生物則不適用。
斜面低溫保藏法：將菌株接種于合適的斜面培養(yǎng)基上，待生長好后置于4℃冰箱保藏，每隔一定時間進(jìn)行移接培養(yǎng)后再將新斜面繼續(xù)保藏。這種保藏方法簡單，存活率高，易于推廣，經(jīng)常使用的菌種可采用這種方法。其缺點是菌種仍有一定強(qiáng)度的代謝活動條件，保存時間不長，而且傳代多，因此菌種容易產(chǎn)生變異。
冷凍干燥法：此法的原理是在低溫下迅速將細(xì)胞凍結(jié)以保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整，然后在真空下使水分升華。這樣菌種的生長和代謝活動處于極低水平，不易發(fā)生變異和死亡，因而能長期保存，一般為5-10年。微生物在此條件下易死亡，所以需加入一些物質(zhì)作保護(hù)劑，一般常用的是脫脂牛奶、血清等。該法存活率高，變異率低，并能廣泛適用于細(xì)菌（有芽孢和無芽孢的）、酵母、霉菌孢子、放線菌孢子和病毒等，因此是目前廣泛采用的好方法。其缺點是手續(xù)煩瑣，操作復(fù)雜，要求嚴(yán)格，并需要有一定設(shè)備條件。
本文參考《發(fā)酵工程原理與技術(shù)》一書。
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